目前，基因组编辑技术已经广泛应用于生命科学的各个方面，许多实验室使用该技术创制了许多突变体材料。但是，对基因编辑材料的筛选和鉴定工作费时费力，而使用一代测序的方法（Sanger测序）鉴定突变体材料效率低而且价格昂贵，无法大规模的对突变材料进行鉴定分析。因此，急需建立一个高通量、低成本的基因编辑个体筛选方法。而二代测序技术（Next-generation sequencing，NGS）不仅大大降低了测序成本，同时还大幅提高了测序通量，并且保持了高准确性。使用NGS技术对基因编辑材料进行鉴定分析是一个理想的方法。

原理简介及步骤

基于多重PCR建库技术，对靶标区间进行两轮PCR来达到建库和富集的目的（如下图所示）。基本的实验步骤如下：
1、针对靶位点区间设计特异性引物，可以在上下游特异性引物带上barcode序列，方便多样品混合；
2、利用步骤1针对靶位点所设计的特异性引物，对目的片段进行首轮PCR，获得目的片段；
3、以步骤2中扩增获得片段为基础，进行第二轮PCR扩增，加上测序接头；
4、混样后，即可送高通量测序；
5、对测序结果进行分析。

  多重PCR建库流程

我司优势及特点

简单、便捷：客户只需要提供原始的材料（植物组织、动物细胞组织等）；
兼容：测序数据不仅可以在我司进行分析解读，也适用于其他分析平台如Hi-TOM网站（http://www.hi-tom.net/hi-tom/）；
精准：测序数据通量高、数据大，可得到最真实的结果。

一代与二代测序鉴定突变体的方法比较

适用范围

1、适用于动植物、微生物等基因编辑材料的鉴定分析；
2、适用于需要对大批量基因编辑样品进行检测分析；
3、适用于鉴定分析敲除效率低的编辑系统，如先导编辑（Prime editor，PE）系统，可以极大的节省成本；
4、可以为开发新的编辑系统检测编辑效率提供服务。

客户下单及项目信息填写

在我司官网http://plant.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写：
1、项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交；
2、提交项目所需要的具体信息，主要是什么类型的编辑材料、样品总数、检测区域基因组。

结题标准

测序结果完整（reads数在102&拆分有数据）。

实验交付内容

1.测序结果：测序结果汇总表（表格将孔编号与样品及扩增靶标进行对应），靶标及检测引物、目标基因组序列，
实验报告：需注明检测总数及每个样品的编号，检测位点说明。

收样标准

实验结果

1、提供每个样品的原始测序数据；
2、由本公司建立的分析方法解读的分析结果：序列表（包含每个样品的支持reads数、突变情况和序列）；
3、提供Hi-TOM网站的解读结果；
4、可根据客户需求，提供每个样品的复核比对结果图片。

植物组织样品取样建议

核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材环境等因素息息相关，为保障获得相对较高质量的核酸，请务必按照以下指导原则准备样本。
1、液氮速冻法
①  植物材料取材后用清水将材料表面的灰尘及泥土冲洗干净，吸干材料表面的液体。
②  植物组织样品取样重量≥200mg，将样品分割成50~100mg左右的小块，放入干净的离心管或带螺纹旋盖的保存管中，立即使用液氮速冻。
③  转移至-80℃低温保存，送样时选择干冰运输寄送。
2、商用核酸保护液保存法
由于植物含细胞壁，从已有经验看来，RNAlater之类的核酸保护液难以充分渗透，对于植物样品提取效果较差，不建议使用；若条件有限，只能使用核酸保护液，请严格按照相应的产品使用说明操作。尽量使组织块尺寸保持在5mm左右，过小不利于样本收集，过大则保护液不能均匀渗透到组织细胞内。
对于多糖多酚丰富的植物样本（特别是木本类植物），需暗处理24-48小时后再取样。

注意事项

1、组织速冻时间：组织离体后，胞内核酸便开始降解，尤其是RNA，故采集时，目的组织离体后，需立即速冻，建议5min内完成，越快越好。
2、组织送样量：送样量过少或过多均不利于提取实验，下限为建议量的一半，上限为建议量的3倍。
3、组织保存管的选择：所有组织样品务必使用离心管或螺纹管保存，切勿直接装入密封袋保存（低温冻脆易破裂，导致样品泄露，交叉污染）。
4、组织样品保存方法选择：首选液氮速冻；没有液氮条件的，可直接放入-80℃冰箱冻存。
5、冻融组织：组织冻存后，一旦冻融，RNA降解概率大于80%，几乎不可能提取成功，此类组织不建议送样。送样前确保组织未发生过冻融情况。
6、对于同一个组织样品需要同时提取DNA和RNA的，请务必分成两管分批次送样。